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      BioToolomics羧基活化磁性瓊脂糖色譜填料產(chǎn)品介紹

       更新時(shí)間:2023-03-31 點(diǎn)擊量:833

      羧基活化的磁性瓊脂糖可用于制備磁性色譜填料。它與含有伯胺基團的配體形成化學(xué)穩定的酰胺鍵,它有一個(gè)長(cháng)間隔區(9個(gè)原子)。目標分子結合后,磁性樹(shù)脂可以很容易地在磁鐵的幫助下從生物原料中分離出來(lái)。

      羧基活化瓊脂糖可用于固定含胺分子。耦合化學(xué)是基于碳二亞胺的,是成功且有據可查的技術(shù)。

      圖片4.png



      1. 屬性

      羧基活化磁性瓊脂糖色譜填料(Carboxyl-activated SepFast MAG 4 HF)由高度交聯(lián)的4%磁性瓊脂糖制成。它可以在更嚴苛的條件下進(jìn)行操作使用,因此可以應用于低pH值和某些高濃度有機溶劑。

      由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結合特性,長(cháng)期以來(lái)一直用于色譜分離。這些顆粒具有開(kāi)孔結構,對大蛋白質(zhì)分子具有出色的傳質(zhì)性能。

      通過(guò)將長(cháng)的親水性間隔臂連接到骨架上來(lái)活化基礎基質(zhì)。它直接與分子中的伯胺基反應,在碳二亞胺試劑存在下被固定。羧基活化磁性瓊脂糖色譜填料(Carboxyl-activated SepFast MAG)20%乙醇中的水懸浮液形式提供。

      1 羧基活化磁性瓊脂糖色譜填料(Carboxyl-activated SepFast MAG 4HF)的特性

      可耦聯(lián)基團

      -NH2

      基質(zhì)

      高度交聯(lián)的4%磁性瓊脂糖(4HF

      粒徑

      50-150 μm

      間隔臂

      9個(gè)原子

      活化水平

      8-19 μmol carboxyl /ml medium

      pH穩定性

      4-13(具有配體依賴(lài)性)

      化學(xué)穩定性

      偶聯(lián)配體能夠接受的所有常用的水性化學(xué)品穩定

      保存

      4-8

      *可應要求提供其他粒徑

      2. 配體固定化

      以下是配體一般的偶聯(lián)流程。

      2.1  將目標配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中,pH值調整為4.5。偶聯(lián)緩沖液的體積可以固定凝膠體積一半或相同。

      2.2  在過(guò)濾裝置中用至少倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗羧基活化凝膠。

      2.3  將洗凈并吸干的凝膠(來(lái)自步驟 2.2)轉移到步驟2.1 制備的溶液中。

      2.4  碳二亞胺作為干粉或預先溶解的溶添加到漿液中至終濃度為0.1 M。如果碳二亞胺預先溶解在水中,則將pH值調整為4.5。

      2.5  在室溫或4-8℃下混合漿料。

      2.6   在第1個(gè)小時(shí)內通過(guò)添加 0.1  M NaOH調節反應pH值至4.5。

      2.7 將偶聯(lián)反應放置2-24小時(shí)。

      2.8 5倍體積的0.1 M 醋酸鹽緩沖液 + 0.5 M NaCl,pH 4.0洗滌凝膠,然后用5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaCl,pH 8.0洗滌凝膠。重復上述洗滌2次以上。

      2.9 使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

      3. 固定化效率的一般考慮

      3.1 pH

      偶聯(lián)反應pH 4.5 - 7.5之間非常有效地進(jìn)行。但是可以?xún)?yōu)化偶聯(lián)pH以獲得最佳結果(例如,高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性)。

      偶聯(lián)反應的第1個(gè)小時(shí)內,pH值會(huì )降低。要記得通過(guò)添加0.1 M NaOH來(lái)調節偶聯(lián)pH值。之后pH值會(huì )趨于穩定。

      3.2 偶聯(lián)方案

      去離子水可直接用作偶聯(lián)溶液。應避免使用含有氨基、巰基或羧基的緩沖溶液,因為它們會(huì )與配體偶聯(lián)發(fā)生競爭。

      可以引入稀釋的某些有機溶劑以提高配體的溶解度。應事先測試此類(lèi)溶劑的適用性。

      3.3 碳二亞胺的選擇

      應使用水溶性碳二亞胺,例如1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺  (EDC)  1?環(huán)己基?3?(2?嗎啉代乙基碳二亞胺  (CMC)(通常合成為 metho?p?甲苯磺酸鹽)。EDC是常用的碳二亞胺試劑。

      3.4 碳二亞胺的濃度

      添加的碳二亞胺的應以化學(xué)計的方式超過(guò)活化的基。建議以最終反應漿料中的0.1  M作為起點(diǎn)。

      3.5 反應時(shí)間和溫度

      可以?xún)?yōu)化偶聯(lián)過(guò)程中配體和活化填料之間的接觸時(shí)間以保持配體的生物活性。

      典型的反應時(shí)間是在室溫或冷藏室中過(guò)夜。

      3.6 屏蔽剩余的活化配體

      如果加入過(guò)量的配體,則可能不需要封閉殘留的活化基團。

      未與配體反應的活化基團應在碳二亞胺存在下通過(guò)添加額外的含有pH 8 - 9伯胺的小分子(例如1 M乙醇胺)來(lái)封端。

      3.7 最終填料的洗滌

      偶聯(lián)反應后需要將未連接或弱連接的配體WAN全洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。

      4. 固定化親和填料的使用

      配體偶聯(lián)填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。

      5. 儲存

      羧基活化磁性瓊脂糖色譜填料(Carboxyl-activated SepFast MAG)應在8℃下儲存。偶聯(lián)的濕填料應在防菌劑(例如20%乙醇)存在的情況下于4-8℃儲存。切勿凍存耦合填料。

      6. 更多信息

      訪(fǎng)問(wèn)北京百奧創(chuàng )新了解更多關(guān)于BioToolomics產(chǎn)品代理信息或聯(lián)系北京百奧創(chuàng )新科技有限公司了解產(chǎn)品信息。 

      7. 訂購信息

      產(chǎn)品

      規格

      貨號

      Carboxyl-activated

      SepFast MAG 4HF

      5 mL

      380201-5ML

      50 mL

      380201-50ML

      1 L

      380201-1L

       


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