腫瘤組織的原代細胞培養有哪些注意事項？

原代培養是直接從生物體組織或器官的一部分進(jìn)行培養，也稱(chēng)初代培養。腫瘤組織的原代細胞培養技術(shù)為腫瘤研究及治療提供充足的細胞來(lái)源是癌癥在體外研究的重要工具，與體內研究相輔相成。但目前腫瘤細胞原代培養成功率不高的許多問(wèn)題還需繼續探討與研究。腫瘤組織的原代細胞培養有哪些注意事項？讓我們一起來(lái)看看吧！

注意點(diǎn)一：取材部位的選擇非常重要，應在癌細胞集中、細胞活力較好的部位取材，盡量避免在壞死區取材；

注意點(diǎn)二：取材后應盡快培養，最好不要超過(guò)24h，如需耽擱時(shí)間，可將組織塊于培養液中浸泡，放置于冰浴或4℃冰箱；

注意點(diǎn)三：癌組織周?chē)难?、脂肪等正常的組織應去除，可以保證癌細胞的純度；

注意點(diǎn)四：取材方法：獲取的組織塊最好能有指尖大小，太小了可能養不起來(lái)，因為細胞有生物學(xué)環(huán)境，細胞多了長(cháng)得也會(huì )快，如果細胞密度太低了，細胞很難長(cháng)起來(lái)，可能的原因是細胞分泌的生長(cháng)因子。

注意點(diǎn)五：切碎癌組織時(shí)，可用眼科剪，也可用小刀，避免用大剪刀，所用刀剪要鋒利，以免挫傷細胞。

注意點(diǎn)六：分散細胞的方法：機械和藥物兩種方法。癌組織不同與正常組織，單純用機械的剪碎辦法，癌細胞就可以游離出來(lái)，成為細胞懸液。常用胰蛋白酶、EDTA消化分離。如果從含有大量堅硬的結締組織分離癌細胞，膠原纖維不能被胰蛋白酶和EDTA消化，則使用膠原蛋白酶消化，如：原代黑色素瘤細胞，黑色素瘤一般長(cháng)在肢端，肢端的角質(zhì)層太厚，就需要膠原蛋白酶消化。

注意點(diǎn)七：接種數量要足夠，造成培養細胞所必須的生物學(xué)環(huán)境；

注意點(diǎn)八：更換培養液的時(shí)可換半量或1/4量，將pH維持在7.2-7.4；

注意點(diǎn)九：新配試劑要做無(wú)菌實(shí)驗，嚴格無(wú)菌操作，防止污染，新手建議不要直接養原代，先拿實(shí)驗室的腫瘤細胞養養練練手；

注意點(diǎn)十：若組織在消化時(shí)間較長(cháng)時(shí)仍未散開(kāi)，可采用多次提取消化法以減少酶對已消化下來(lái)的細胞的損傷；

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